“强强联手”——生物惰性液相与多角度光散射检测器联用，助力双抗分子量准确测定 | 岛津分析检测-凯发k8国际首页登录
2024-02-21
双特异性抗体（简称“双抗”）是一种新型的抗体药物，它可以同时发挥两种单抗联用的协同作用，临床价值很高，但其质量控制的要求也非常严格。在双抗研发生产过程中，需要对双抗分子的大小异质性进行测定，以确认双抗的连接情况，保障产品质量。
然而双抗分子量的测定条件中不仅需要使用高浓度的盐进行洗脱，而且紫外检测器无法直接得到分子量，这对常规液相系统管路的耐腐蚀性及检测器提出了挑战。
本文采用岛津生物惰性液相色谱仪nexera xs inert搭配多角度光散射检测器（mals）测定双抗分子量，为推断双抗连接情况提供分析依据。
分析条件
流动相a：50mm磷酸盐缓冲液 300mm nacl（ph=6.8）
流动相b：乙腈
检测器1：二极管阵列检测器spd-m40a
检测器2：多角度光散射检测器mals
样品制备条件及其他分析条件略
结果
mals需要通过测定已知分子量的标准溶液得到仪器响应常数，图1是牛血清蛋白标准溶液(66500da)色谱图，计算得到mals响应强度为2.9626×10-7，spd-m40a响应强度为8.8552×105。
图 2为双抗样品色谱图，该样品为单抗fc端融合型双抗，双抗样品检出3个主要色谱峰，计算得到峰1、峰2、峰3重均分子量mw分别为197708da、145121da、56401da，三峰重均分子量与数均分子量的比值（mw/mn）均为1.00，峰2与峰3分子量之和201522da，与峰1分子量偏差为1.92%，因此推测出：
峰1为双抗（单抗fc端融合scfv）
峰2为单抗（未融合scfv）
峰3为单链抗体scfv。
双抗分子量测定信息见表1。
图1 牛血清蛋白标准溶液色谱图
图2 双抗样品色谱图
表1 双抗样品分子量分布
结论
本文通过体积排阻色谱法（sec）联合多角度光散射检测器（mals）对单抗fc端融合型对称分子样品大小异质性进行分析，sec根据分子量大小分离双抗样品，mals检测器测定双抗样品分子量，从而推断双抗样品连接情况。此方法简单高效、准确度高，可用于测定双抗样品分子量。
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