科技创新：岛津技术揭示雪卡毒素（ctx）及其类似物高灵敏度检测新方法 : shimadzu ssl-凯发k8国际首页登录

前言

　　雪卡毒素(也称西加毒素)中毒是由雪卡毒素（ctxs）引起的，是世界上常见的食物中毒来源之一，据调查，ctxs每年大约造成5万人中毒，是造成人类中毒分布最广、人数最多的一种海洋毒素之一。目前发现ctx的类似物有30余个。

　　雪卡毒素是一种由底栖甲藻产生的热稳定脂溶性聚醚毒素，在天然样品中以微量存在，当浓度达到0.2μg/ kg时具有神经毒性作用，ctxs的半数致死量（median lethal dose，ld 50）为0.45 μg/kg，比河豚毒素（tetrodotoxin，ttx）的毒性还要强100倍，是重要的神经毒素。美国 fda 和 efsa 建议控制水平为 0.01 μg ctx1b 当量/kg。

　　根据岛津新发布的一项技术，通过向流动相中添加非常少量的碱金属（如na 和li ）来优化一种使用钠和锂加合物[m na] 和[m li] 离子检测ctxs的高灵敏度方法。通过这项技术，可以使用lcmsms成功分离及检测fda推荐的低浓度的ctxs。本文介绍了[m li] 新方法的分析条件和准确度。

ctxs标准品

　　1、5种ctx类似物的标准品由jfrl（日本食品分析中心）提供

　　2、9种ctx类似物的混标样品由nihs（日本国立医药品食品卫生研究所）提供

分析条件

　　仪器型号：nexera x3 uhplc lcms-8060nx

　　分析结果

　　1、[m na] 或[m li] 离子的形成和碰撞能（ce）的优化

　　在流动相中添加na 或li 会通过阳离子化增加钠或锂加合物的形成。为了获得所需的离子[m na] 或[m li] ，可在流动相中加入微量碱金属。下图为不同流动相条件下ctx1b的分析示例，本研究中分析的其他目标化合物也获得了相同的结果。当向流动相中添加li 时，未检测到 [m na] 。这些结果表明，可以通过使用[m li] 等替代离子来实现更高的灵敏度。

考察不同流动相条件下ctx1b的分析结果（sim）

　　但是，[m na] 和[m li] 母离子没有提供任何有用的产物离子，因此优化ce用以监测[m na] >[m na] 或[m li] >[m li] 在mrm分析模式下提供最高的信噪比。ctx1b的优化ce如下表所示。其余8种类似物的最佳ce以类似的方式进行了优化。

ce与峰面积或信噪比之间的关系

　　2、改善色谱峰分离度和灵敏度

　　在下图中，比较了使用文献方法、添加na的流动相（b）和添加li的流动相（c）对目标化合物的分离。2,3-dihydroxyctx3c和51-hydroxyctx3、49-epi-ctx3c和ctx3c、ctx4a和ctx4b在新条件下表现出明显更好的分离。除2,3-dihydroxyctx3c和51-hydroxyctx3外的6种类似物和ctx3c在加na流动相中具有良好的灵敏度。实验证实，使用添加li的流动相时，9 种ctx类似物的灵敏度相当。

9 种ctx类似物的mrm色谱图（1 ng/ml nihs混标样品）

　　3、定量限（loq）的评估

　　使用jfrl标准品生成校准曲线，以确认[m li] > [m li] 。校准曲线最低点的每个色谱图如下图所示。确定校准曲线的范围，使每个校准点的3次重复分析的平均准确度为100±5%，并指定最低点作为 loq。用5 g鱼肉制备1 ml测定溶液时，5种标准品的loq范围为0.0004至0.0012μg/kg。

校准曲线最低点的mrm色谱图

小结

　　岛津最新的技术介绍了一种通过向流动相添加微量碱金属（如na 和li ）来提高ctx检测灵敏度的方法。这项工作成功证明了使用lc/ms/ms在低浓度下分离和检测ctx类似物，符合fda限度要求。

　　注：本产品仅用于研究，不能用于医疗诊断目的。